前言

除非在一个国家流行的禽流感(AI)病毒亚型已经清楚，否则其血清学诊断应分两步进行。第一步是检测抗任何AI病毒的抗体，第二步是对第一步检测得到的阳性样本再进行检测，鉴定引起感染的病毒亚型。

用于诊断目的的试剂应使用经过OIE鉴定的试剂，并应按照OIE手册中的操作步骤进行。

第一步：检测抗组抗原(A型)抗体。

可检测抗A型流感病毒组抗原的抗体。抗原抗体反应是针对AI病毒的核蛋白(NP)和基质(M)蛋白。所有的A型流感病毒，不论是H亚型还是N亚型，都存在这些抗原。这类检测阳性表明被检鸟感染了A型流感病毒，但是不能据此推断出任何有关导致血清阳转的AI亚型的信息。制备检测用AI病毒亚型抗原用于检测时，阳性结果并不代表引起疾病的病毒毒株。

AGID：琼脂免疫扩散试验。用于鸡和火鸡的血清检测，该试验简单可靠。该试验特异性很强，但灵敏度有限，因此必须用于大量样本的检测。该试验可以在拥有基本实验设施的任何实验室进行。由于水禽不能产生沉淀性抗体(precipitating antibodies)，该试验不适于用于水禽的检测。另外，对于其它禽类，该试验还未被完全证明有效。

ELISA：酶联免疫吸附试验。该试验需要有更加先进的实验设施，必须包括分光光度计。该试验灵敏度很高，但特异性有限。对于间接ELISA试验，必须注意确保二抗的种属针对性。竞争性ELISA的优点在于可以检测任何种类禽类的血清。要按照生产厂家的说明书进行，尽量不要用于检测试剂盒说明书中未提到的物种。

备注：水鸟(野生或家养)中A型血清学阳性是正常现象。

第二步：检测亚型特异性抗体(H亚型)。

这项检测用于已确定感染了AI的禽类(抗组抗原——A型抗原检测阳性，或根据病史判断)。该试验用于确定导致血清学阳性的病毒血凝素亚型。血凝抑制试验(HI test)就是基于该目的。为了避免诊断试剂的浪费，专家建议应立即排除或确认上报禽流感(Notifiable Avian Influenza ，NAI)病毒的血清学阳性样品。最初的检测应该使用H5和H7抗原。最初的诊断步骤中至少应使用H亚型相同，但神经氨酸酶亚型不同的两种抗原(例如H5N1和H5N9、H7N1、H7N3)。阳性样本的标准是抑制4个血凝素(HA)单位的血凝活性，滴度至少是1：16(24)。

由于神经氨酸酶抗原的同源性可能会导致与其他H亚型的低水平的交叉反应。交叉反应一般不会高于1：16(24)，并且用另一个神经氨酸酶不同的抗原进行检测时，交叉反应就会消失。

例如：一份血清样本用H9N2抗原进行检测时滴度是1：256(28)。用H5N2抗原检测时，阳性的抑制结果为1：8(23)。用H5N9抗原检测时该样本则为阴性。

关于NAI血清学阳性的情况处理

在某一国家，当首次检测出抗H5或H7亚型病毒的抗体时，该结果应由OIE指定的实验室进行确认，并且要立即进行病毒分离方面的工作。

资料来源：http://www.oie.int/eng/normes/mmanual/a_00037.htm

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